Японские ученые из Токийского технологического института разработали новый метод получения белковых кристаллов вне клеток. Это позволило им изучить структуру кристаллов некоторых белков с разрешением около 2 ангстремов. Исследование опубликовано в журнале Scientific Reports.
Белки способны образовывать микроскопические кристаллы. Чтобы исследовать их структуру и функции, ученые разработали метод внутриклеточной кристаллизации белков (ICPC). Он позволяет наблюдать белковые кристаллы прямо внутри клеток, не требует этапа очищения и сложных химических процедур. Однако этот метод используется не так часто, как хотелось бы, так как белковые кристаллы, образующиеся в клетках, часто слишком малы. Поэтому их сложно анализировать.
Японские ученые разработали метод бесклеточной кристаллизации белков (CFPC). Он представляет собой гибрид между кристаллизацией белков in vitro и ICPC. С помощью такого подхода можно быстро получить белковые кристаллы, не прибегая к сложным методам очистки. Полученные с помощью этого метода структуры можно изучать с достаточно высоким разрешением. Исследователи показали это на примере мономера полиэдрина — вирусного белка, который вырабатывается клетками насекомых при циповирусной инфекции. С помощью CFPC ученые получили полиэдральные кристаллы этого белка всего за 6 часов и используя всего 20 мкл реакционной смеси. С помощью сканирующей электронной микроскопии ученые доказали чистоту полученных кристаллов и смогли определить их структуру с разрешением 1,95 ангстрема. Новый подход также помог изучить структуру белка кристаллических включений А (CipA) с разрешением 2,11 ангстрема. Это было произведено впервые.
Разработка этого метода — большой шаг вперед в области структурной биологии. С помощью CFPC можно будет анализировать нестабильные белки или те белки, которые удается выделять только с низким выходом. Такие белки не получается исследовать с помощью привычных методов. Как считают исследователи, их метод позволит анализировать белковые кристаллы, которые играют важную роль в живых организмах.
Подписывайтесь на InScience.News в социальных сетях: ВКонтакте, Telegram, Одноклассники.
